科普 | 你了解HIV潜伏储存库的检测方法吗？

20世纪90年代首次采用VOA检测HIV潜伏储存库，将静息CD4+T细胞稀释到每孔只有一个细胞后，激活细胞内病毒基因表达并诱导HIV-1从潜伏感染细胞中释放，得出有复制能力的潜伏感染细胞数。该方法价格昂贵、需要大量血液培养、需要在生物安全三级实验室进行2-3周的培养，且刺激一次不能激活所有的潜伏病毒，低估HIV潜伏储存库大小。

在T细胞激活情况下，通过qPCR检测整个HIV-1生命周期不同形式的RNA，以RNA为基础的检测缩短了细胞培养时间。但一轮刺激并不能激活所有T细胞产生HIV RNA，会在一定程度上低估HIV潜伏储存库大小。

基于PCR方法检测HIV DNA成为更简便检测潜伏储存库的方法，并为VOA试验提供补充。这种方法简单快速。从qPCR检测HIV-1 DNA确定携带HIV DNA数量，到数字PCR检测HIV-1 DNA进行HIV绝对定量，还有Alu-PCR检测整合HIV-1 DNA数量去评价HIV潜伏储存库大小。

由于PCR方法检测出的病毒97%存在缺陷^[1]，缺陷病毒不能产生具有传染性的HIV，且受到细胞毒性T细胞的积极监控^[2]。所以这种方法因为缺陷性病毒的扩增而被严重夸大。

中断治疗后病毒反弹时间反映了HIV潜伏储存库的大小，尽管观察治疗中断后病毒反弹时间是确定患者是否治愈的唯一方法，但是该方法作为检测潜伏储存库大小时，存在伦理问题，如抗逆转录病毒治疗的中断或重新治疗会产生一定的耐药性。

PCR检测HIV潜伏储存库时被缺陷病毒严重夸大后，随后实验研究发现90%缺陷病毒的缺陷发生在包装信号（Ψ）和env区，通过数字PCR检测Ψ和env区识别出完整病毒与缺陷病毒。

这些方法中，VOA耗费大量人力物力并且低估了储存库大小；基于PCR的方法高估真实储存库大小；IPDA既避免了耗费时间人力物力、同时能排除掉缺陷原病毒，快速检测到最为接近真实储存库大小，准确检测出潜伏储存库大小有利于艾滋病的治愈。